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Kann „Cas9“ (beteiligt am Crispr-cas9-Mechanismus) als Restriktionsenzym angesehen werden?

Kann „Cas9“ (beteiligt am Crispr-cas9-Mechanismus) als Restriktionsenzym angesehen werden?


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Ich habe viele Fragen zum Cas9-Enzym. Wenn der Cas9-guideRNA-Komplex (crRNA und transcrRNA) an die DNA-Sequenz angehängt wird, welche Art von Bindung schneidet dann das Cas9? Degradiert Cas9 die gesamte DNA-Sequenz, die zur Leit-RNA komplementär ist?

Wenn die Frage zuvor "Nicht" lautet, wie wird dann die Sequenz bestimmt, die auf der DNA komplementär zur Leit-DNA geschnitten wird? Welche Art von Enzym ist das Cas9?


Cas9 ist eine Endo-Desoxyribonuklease (UniProt-Q99ZW2). Es hat auch eine 3'-5'-Exonuklease-Aktivität, durch die es die DNA ein wenig von der Schnittstelle abschneidet (aber nicht zu viel).

Obwohl Cas9 eine Endonuklease ist und als Immunitätsmechanismus gegen Viren (wie Restriktionsenzyme) entwickelt wurde, werden sie nicht als Restriktionsenzyme betrachtet. Einer der wichtigsten Unterschiede besteht darin, dass die Restriktionsenzyme keine RNA oder DNA als Bindeglied benötigen, um die Zielstellen in der DNA zu identifizieren; ihre DNA-Bindungsdomänen können die Restriktionsstellen selbst erkennen.

Cas9 kann nicht einfach jede zur Leit-RNA komplementäre DNA spalten. Es benötigt PAM-Sequenzen (Protospacer-Advantage-Motive) neben der Zielstelle, um diese zu spalten.

Weitere Informationen finden Sie auf der Wikipedia-Seite zu CRISPR oder lesen Sie eine Rezension.